Toggle-In技术是用于基因定点插入的CHO细胞株改造技术。
CHO细胞株改造一般都通过对CHO 细胞株的基因改造,来获得新的CHO细胞性状,比如,转入抗凋亡的基因来改善CHO细胞的存活能力。不过,在改造CHO细胞株过程中,会遇到两个技术问题:
(1)如果每个基因都用一个带有特定抗药性基因的载体,那么转入3~4个基因后,会把现有的抗药性基因都用完了。而且在转化抗体基因时,还要用到至少一个抗药性基因。
(2)采用随机插入基因的常规方法。能高表达基因A的细胞株,不一定能高效表达基因B。在同一个细胞转入几个基因以后,就会造成细胞株的异质性。由于gene silencing,插在不同染色体部位的基因,会按不同的速度慢慢关闭表达,更增加了细胞株的不可控性。
为了克服上述技术弊端,安泰吉公司研发出了一套独具匠心的技术系统,称为“Toggle-In”。我们先用基因打靶技术,在CHO细胞基因组中找到一个表达的Hot-Spot,然后依次用两个载体,只用两个抗药性基因就可以实现连续、循环交替的、无上限的基因组定点插入。而且,这些CHO 细胞克隆,每个都是均质的,可以做到插入片段1:1表达。



这项技术成功地解决了困扰业界多年的细胞株改造的技术瓶颈。已申请专利保护。目前安泰吉公司已利用该技术把增加CHO 细胞蛋白分泌、折叠、促生长抗凋亡和促总体代谢的主调控基因等6~8个基因依次转入CHO基础细胞株,针对不同的目标蛋白提供个性化的CHO细胞表达系统。除此之外,该技术还可以用于构建功能型细胞株,为药物功能评价提供模式细胞。安泰吉公司已经成功地构建了带有CD16、CD89、FcRn等不同Fc受体的模式细胞系,为靶向单抗药物的药效评价提供最合适的模式细胞系。






